Pasteur pipetinin çalışma prensibi temel olarak yerçekiminin- tahrik ettiği akış ve kılcal hareketin yanı sıra sıvıların aspirasyonunu ve transferini kolaylaştırmak için hava basıncı diferansiyellerinin manuel kontrolüne dayanır.
Manuel Emme Kontrolü: Operatör, tüp içinde negatif basınç oluşturmak için pipetin geniş ucuna -ağızdan veya yardımcı bir lastik ampul kullanarak- emme uygular ve böylece sıvıyı ince uca çeker.
Yerçekimi- Tahrikli Dağıtım: Emme serbest bırakıldığında sıvı, yer çekiminin etkisi altında doğal olarak dışarı akar; pipet gövdesinin hafifçe sıkılması veya alıcı kabın eğilmesiyle de dağıtıma yardımcı olunabilir.
Damlacık Tekrarlanabilirliği: "Mililitre başına damla" oranını kalibre eden pipet, yaklaşık niceliksel aktarım sağlar ve bu da onu mutlak hassasiyetten ziyade tekrarlanabilirlik gerektiren prosedürler için uygun hale getirir.
Sterilite Güvencesi: Kullanmadan önce, geniş uca bir pamuklu tıkaç yerleştirilebilir ve kullanım sırasında mikrobiyal kontaminasyonu önlemek için sterilize edilebilir (bu özellikle mikrobiyolojik deneylerde yaygın bir uygulamadır).